Ensaio de detecção de apoptose Annexin V-FITC

Ensaios sensíveis para aplicações em biologia celular. Detecção de células apoptóticas e determinação quantitativa por citometria de fluxo

PRODUTO:
O ensaio de detecção de apoptose Xpert Annexin V-FITC oferece um método simples, rápido e confiável para a detecção fluorescente de células apoptóticas e determinação quantitativa por citometria de fluxo. Este ensaio é baseado na ligação de anexina V marcada com FITC a locais de fosfatidilserina (PS) presentes na superfície da membrana de células apoptóticas combinadas com a ligação de iodeto de propídio (PI) ao DNA celular em células necróticas em que a integridade da membrana celular foi completamente comprometido. Isso permite distinguir entre células viáveis, células apoptóticas precoces e células necróticas.
A apoptose é um processo gradual que leva à morte celular, caracterizado por características morfológicas específicas. A translocação de PS do folheto interno para o externo da membrana plasmática, expondo assim o PS ao ambiente celular externo, é um dos primeiros fenômenos de apoptose, precedendo a perda de integridade da membrana que ocorre em estágios posteriores da apoptose ou durante a necrose. Portanto, ao usar uma combinação de Anexina V marcada com FITC fluorescente verde (Anexina A5) e IP fluorescente vermelha, as células viáveis ​​são negativas para ambos, enquanto as células apoptóticas iniciais são positivas para Anexina V, uma vez que a Anexina V se liga fortemente a PS, mesmo quando rotulada com FITC, mas negativo para PI (pois as membranas intactas são impermeáveis ​​ao PI). As células que entram em estágios posteriores de apoptose ou necrose serão positivas para anexina V e PI.
Embora este ensaio não faça distinção entre células que morreram como resultado de apoptose e células que sofreram outra via necrótica, medindo a apoptose ao longo do tempo, as células podem frequentemente ser seguidas de anexina V-negativa / PI-negativa via anexina V- positivo / PI-negativo para Anexina V-positivo / PI-positivo. Encontrar todos esses três fenótipos ao mesmo tempo dentro de uma população de células, ou observar uma mudança nesses três estágios dentro de uma população de células ao longo do tempo, é, portanto, um forte indicador de apoptose.